ACE色譜柱的選購需以分離目標為導向,綜合權(quán)衡固定相特性、物理參數(shù)及系統(tǒng)約束。建議優(yōu)先評估樣品性質(zhì)與分離目標,再匹配相應(yīng)固定相,并通過實驗驗證優(yōu)化方案。
以下是關(guān)于ACE色譜柱的選購要求的闡述:
一、明確應(yīng)用目標與樣品特性
分析物性質(zhì)
極性與溶解度:若需保留強極性化合物(如多肽、糖類),優(yōu)先選擇親水嵌段固定相;疏水性樣品(如脂溶性維生素)則適用高碳載量的C18-HL柱。
酸堿性與穩(wěn)定性:堿性化合物易與硅羥基發(fā)生次級作用,導致峰拖尾。應(yīng)選用超惰性固定相(如C18系列),其通過堿滅活處理減少硅羥基殘留,提升分離效果。
分離模式需求
反相色譜:常規(guī)選擇C18或C8柱;若需增強對芳香族化合物的選擇性,可選用苯基柱。
方法開發(fā)靈活性:對于復雜混合物(如異構(gòu)體),C18-AR或C18-PFP柱融合兩種鍵合相優(yōu)勢,提供差異化選擇性。
二、核心物理參數(shù)選擇
粒徑與柱效
≤3μm粒徑:適用于UHPLC,柱效最高,但背壓顯著增加。
5μm粒徑:兼顧柱效與系統(tǒng)兼容性,是HPLC常用選擇。
≥10μm粒徑:用于快速篩選或制備級分離。
柱尺寸設(shè)計
長度:150mm為常規(guī)平衡選擇,250mm適用于復雜樣品,短柱用于高速分離。
內(nèi)徑:標準分析選4.6mm,微量分析用2.1mm,制備級選10mm以上。
孔徑適配性
100Å:適用于小分子(分子量<1000 Da)。
300Å:大孔徑支持蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子的分離。
三、系統(tǒng)兼容性與操作考量
設(shè)備適配性
UHPLC系統(tǒng):須選用亞2μm填料柱,耐受高壓。
制備型HPLC:選擇大內(nèi)徑柱,降低堵塞風險。
流動相限制
高水相條件:C18-AQ柱采用極性嵌入技術(shù),抑制親水作用,維持穩(wěn)定保留。
pH值:避免使用傳統(tǒng)硅膠基質(zhì)柱,可選擇雜化顆?;蚓酆衔镏?/div>